斑馬魚(yú)行為軌跡跟蹤系統(tǒng)(DanioVision)是一種多功能研究工具，可使用適合該設(shè)備的孔板來(lái)研究斑馬魚(yú)。斑馬魚(yú)研究中使用的標(biāo)準(zhǔn)孔板有 24、48 或 96 孔。

孔板尺寸是否重要？

Wolter和Svoboda在一篇《神經(jīng)科學(xué)方法》（Neuroscience Methods）論文中描述了他們?nèi)绾问褂?/span>斑馬魚(yú)行為軌跡跟蹤系統(tǒng)來(lái)研究使用孔板的大小尺寸是否會(huì)影響基于運(yùn)動(dòng)的晝夜節(jié)律[1]。原因顯而易見(jiàn)：孔板中的孔數(shù)越多，意味著（可移動(dòng)的）空間越小。增加研究的孔數(shù)可以提高研究的產(chǎn)量，但可能會(huì)降低研究結(jié)果的穩(wěn)定性。

使用斑馬魚(yú)行為軌跡跟蹤系統(tǒng)進(jìn)行研究

斑馬魚(yú)行為軌跡跟蹤系統(tǒng)（DanioVision）是一款用于斑馬魚(yú)和其它小型生物的高通量跟蹤系統(tǒng)，可應(yīng)用于許多領(lǐng)域的研究，例如癲癇行為研究、晝夜節(jié)律、運(yùn)動(dòng)控制、運(yùn)動(dòng)障礙、神經(jīng)發(fā)育等。無(wú)論使用的是6、12、24、48還是96孔板，該觀察箱都可以容納孔板，并對(duì)其中的斑馬魚(yú)幼魚(yú)進(jìn)行高通量觀察分析。也可以支持使用培養(yǎng)皿或其他小容器。

孔板尺寸的變化會(huì)導(dǎo)致行為差異嗎？

斑馬魚(yú)幼魚(yú)在環(huán)境變化（如光暗轉(zhuǎn)換）的觸發(fā)下會(huì)增加運(yùn)動(dòng)，Emran 等人于2008年對(duì)這一特定現(xiàn)象進(jìn)行了研究[2]。基于此，Wolter 和 Svoboda在他們的論文中指出，許多研究小組都在研究斑馬魚(yú)的行為，以觀察神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和功能，但所使用的孔板卻存在很大差異：有些小組在 96 孔板中進(jìn)行這些行為測(cè)定，而有些小組則在 24 孔板中進(jìn)行這些測(cè)定。這種尺寸差異對(duì)斑馬魚(yú)發(fā)育階段的（晝夜節(jié)律）行為有何影響？

孔板中的長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)面臨風(fēng)險(xiǎn)

使用斑馬魚(yú)行為軌跡跟蹤系統(tǒng)對(duì)斑馬魚(yú)在 5-23 dpf 期間的晝夜節(jié)律（通過(guò)運(yùn)動(dòng)）進(jìn)行了跟蹤和分析。圖 1顯示了同時(shí)跟蹤24只幼魚(yú)的示例，并顯示了幼魚(yú)最初五分鐘的活動(dòng)軌跡。

圖1

他們?cè)?/span> 12 孔板（直徑20毫米）、24 孔板（直徑15毫米）、48 孔板（直徑 10 毫米）和 96 孔板（直徑 6.54 毫米）中記錄了 5-6 dpf 幼魚(yú)27小時(shí)的運(yùn)動(dòng)活動(dòng)（圖 2）。無(wú)論孔板大小如何，幼魚(yú)的晝夜節(jié)律看起來(lái)都相對(duì)典型。

圖2

然而，在單獨(dú)分析時(shí)，典型晝夜節(jié)律(typical CR)的百分比隨著每板孔數(shù)的增加而下降。在48孔板和96孔板中跟蹤幼魚(yú)與在12孔板和24孔板中跟蹤幼魚(yú)相比，個(gè)體典型晝夜節(jié)律出現(xiàn)的一致性較差。進(jìn)一步分析比較了不同孔板的典型晝夜節(jié)律百分比，12孔板和24孔板的典型晝夜節(jié)律出現(xiàn)率沒(méi)有差異，但24孔板和48孔板以及24孔板和96孔板的典型晝夜節(jié)律出現(xiàn)率存在顯著差異。

在含有24個(gè)或更多孔的板中飼養(yǎng)幼魚(yú)時(shí)，除了晝夜節(jié)律變異性增加外，幼魚(yú)活動(dòng)的幅度也急劇下降50%以上。在孔數(shù)較多的孔板中看到的個(gè)體變異性增加可能是由于孔徑減小，活動(dòng)空間就更小了。由于在12孔板或24孔板中跟蹤的幼魚(yú)的典型晝夜節(jié)律出現(xiàn)率沒(méi)有差異，他們決定在24孔板中進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。在這些孔板中，幼魚(yú)表現(xiàn)出更高的運(yùn)動(dòng)活性。

本文發(fā)現(xiàn)，當(dāng)監(jiān)測(cè)5-23 dpf幼魚(yú)的運(yùn)動(dòng)活動(dòng)作為晝夜節(jié)律的讀數(shù)時(shí)，在96孔板中跟蹤幼魚(yú)的高通量方法可能會(huì)面臨挑戰(zhàn)。對(duì)于短期實(shí)驗(yàn)而言，使用96孔板所發(fā)現(xiàn)的這些限制還有待證實(shí)。

總結(jié)

最終，Wolter 和 Svoboda 提出了明確的建議：由于晝夜節(jié)律（通過(guò)運(yùn)動(dòng)行為衡量）的變異性，長(zhǎng)期斑馬魚(yú)行為學(xué)實(shí)驗(yàn)不推薦在48孔板或96孔板中進(jìn)行，使用24孔板使這些研究從高通量轉(zhuǎn)變?yōu)橹械韧繉?huì)是更好的選擇。

參考文獻(xiàn)

1.Wolter, Matthew E.; Svoboda, Kurt R. (2020). Doing the locomotion: Insights and potential pitfalls associated with using locomotor activity as a readout of the circadian rhythm in larval zebrafish. J. Neurosci. Methods, 330, 108465

2.Emran, Farida; Rihel, Jason; Dowling, John E. (2008). A Behavioral Assay to Measure Responsiveness of Zebrafish to Changes in Light Intensities. J. Vis. Exp.(20), 923

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